产品货号:
GS0247
中文名称:
原位细胞凋亡检测试剂盒(POD)
英文名称:
In Situ Cell Apoptosis Detection Kit, POD
产品规格:
20T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
细胞凋亡在许多生理过程中是至关重要的。目前已经描述了几种鉴定细胞凋亡的方法。核内解离被认为是凋亡的关键生化事件,导致双链,低分子量DNA片段以及高分子量DNA中的单链断裂。可以通过在酶反应中用修饰的核苷酸标记游离的3'-OH末端来鉴定那些DNA链断裂。末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)可以催化DIG-dUTP释放3'-OH DNA末端。DIG-dUTP首先与生物素偶联的抗地高辛抗体反应,后者与链霉抗生物素蛋白(SABC)结合。结合DAB,在显微镜下分析凋亡细胞染色黄色。
组分 | 规格 |
组分A:Labeling Buffer | 5mL |
组分B:TdT(20×) | 100μL |
组分C:DIG-dUTP(20×) | 100μL |
组分D:Blocking Reagent | 20mL |
组分E:生物素标记digoxin抗体 | 100μL |
组分F:SABC(100×) | 100μL |
组分G:Protein K(200×) | 250μL |
组分H:抗体稀释液 | 20mL |
阳性对照样品 | 2T |
保存:-20℃,避光,有效期1年。
- 在染色过程中,避免组织干燥。
- 使用前,请将试剂盒所有组份离心。
- 样品制备:
- 对于细胞涂片:在室温下用4%多聚甲醛固定30~60分钟,并用PBS冲洗两次,每次2~5分钟。
- 对于冷冻切片:在室温下用4%多聚甲醛固定30~60分钟,并用PBS冲洗两次,每次2~5分钟。
- 对于石蜡切片:根据标准方案进行脱水和脱水组织切片,并用PBS冲洗两次,每次2分钟。
- 对于细胞涂片:在室温下用4%多聚甲醛固定30~60分钟,并用PBS冲洗两次,每次2~5分钟。
- 加入50μL新鲜制备的3% H2O2,并在室温下孵育10分钟。
- 用双蒸水洗涤三次,每次2分钟。
- 用0.01M TBS将Protein K 200×(组分G)稀释成1×工作液。(0.01M TBS的制备:加入8.5g NaCl,1.2g Tris和0.45~0.5mL乙酸至1L双蒸水中,溶解,混匀。)
- 加入20~100μL Protein K工作液至样品中(仅限石蜡切片,细胞和冷冻切片不需要蛋白K消化),并在37℃下消化5~15分钟。然后用0.01M TBS冲洗3次,每次2分钟。
- 最佳的消化时间应根据细胞类型,实验目的等因素决定。
- 反应混合物的制备:加入1μL TdT (组分B) and 1μL DIG-dUTP (组分C)至18μL Labeling Buffer (组分A)中,混匀。
- 将反应混合物加入到样品中,在二氧化碳培养箱中,37℃,孵育2小时。
- 用0.01M的TBS洗涤三次,每次2分钟。Rinse with 0.01M TBS three times,2minutes each time.
- 加入50μL Blocking Reagent (组分D),室温孵育30分钟,丢弃阻断试剂,在此步骤无需洗涤样品。
- 用抗体稀释液(组分H)按照1:100的比例稀释生物素标记digoxin抗体(组分E),混匀,加入50μL至样品中。
- 在二氧化碳培养箱中,37℃,孵育2小时
- 用0.01M TBS洗涤3次,每次两分钟。
- 用抗体稀释液(组分H)按照1:100的比例稀释SABC (组分F),混匀,加入50μL至样品中。
- 在二氧化碳培养箱中,37℃,孵育2小时
- 用0.01M TBS洗涤3次,每次五分钟。
- 选购DAB显色试剂盒(货号:GS4974),将900μL DAB Buffer、50μL DAB Substrate(20X)和50μL DAB Chromogen(20X)混合均匀,配制成DAB显色工作液。
- 在每个载玻片上加入50μL DAB显色工作液,避光,并在室温下孵育5~10分钟。
- 用双蒸水洗涤载玻片。
- 用苏木素染液染色5~10分钟.
- 苏木素染色的时间依赖于所用苏木素的种类。
- 用双蒸水冲洗两次,每次5分钟。
- 75%乙醇中室温浸泡5分钟;
- 85%乙醇中室温浸泡5分钟;
- 95%乙醇中室温浸泡5分钟;
- 二甲苯室温浸泡15分钟,
- 中性树胶封片:加中性树胶盖玻片封片。
相关搜索:原位细胞凋亡检测试剂盒(POD),原位细胞凋亡检测试剂盒,细胞凋亡检测试剂盒,In Situ Cell Apoptosis Detection Kit, POD